食品微生物实验零基础教程

在为企业化验员完成了近百次的化验员培训课程后，我们培训讲师们整理了这份微生物实验零基础培训教程，从培训的流程到过程的重要点及注意事项都给您清清楚楚的罗列出来。

Part.1 实验前准备：

1、演示讲解培养基的称量、溶解、包扎、灭菌过程以及注意事项；

2、要求学员亲自操作整个流程。

称取培养基时，要注意少量多次，动作迅速敏捷减少瓶内培养基暴露在空气中的时间，防止吸潮。取出的培养基不允许再次放入瓶内，以免引起整瓶培养基的污染。

注意！！！使用天平前，天平需预热半小时，待其稳定后进行称量。

培养基溶解时，要注意将瓶壁以及瓶底上的培养基溶解到水中，准确量取超纯水（正确使用量筒），否则影响培养基浓度。

配置好的培养基包扎时，要注意手法，包扎时要给上端牛皮纸留出一定空间，防止灭菌过程中产生的气体冲破牛皮纸，造成培养基污染。

灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效灭菌时间。

注意！！！开启灭菌锅时要看两表：

一是温度表，温度至少降至60℃-70℃为宜，温度太高会造成人员烫伤和温差过大培养基迸溅。

二是压力表，压力要归零。如果压力未归零，切记不要开锅，避免引发玻璃器皿的炸裂或爆炸，造成人员损伤。

Part.2 微生物菌落检测流程：

取样：固体和半固体样品称取25g样品,液体样品用无菌吸管吸取25mL样品，放到盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶或无菌均质袋内

注意！！！液体样品放入到无菌锥形瓶中，瓶内应放适当数量的无菌玻璃珠，起到混匀的作用。固体或半固体样品放入到无菌均质袋内，进行均质混匀。

稀释：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1∶100的样品匀液。同样的方法制备10倍系列稀释样品匀液。

注意！！！每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

吸取样品匀液放入无菌平皿内,倒入平板计数琼脂培养基，转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后,将平板翻转（倒置培养）,36°C±1培养48h±2h。水产品30°C±1°C培养72h±3h。

Part.3 实验注意事项：

（1）吸取样品匀液时要做平行，即每个稀释度做两个平皿。

（2）实验要做空白对照：分别吸取1mL灭菌生理盐水到平皿中做空白对照。（若空白有菌落生长则该实验无效）。

（3）每瓶培养基均要做空白，而且倾倒培养基时要先倒空白。

（4）倾倒培养基温度在 46℃左右，不可过烫，避免将菌烫死；也不 可温度过低，否则融化好的培养基会结块凝固，不便于观察结果。

（5）尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。

（6）如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板。